Картина приурочена к 100-летию Disney, юбилей которой отмечается сегодня, 16 октября. События «Однажды в студии» происходят в офисе Disney, после того как все сотрудники ушли домой. Мультяшки воспользовались их отсутствием, чтобы отпраздновать как надо.

В короткометражке участвуют 543 персонажа из старых и новых мультфильмов.